Skip to main content

Експериментальне дослідження

Оцінка м'язових змін після внутрішньом'язового застосування ЕНДОПІЛ

Автори дослідили зміну ходи та тканинну реакцію м'язів, які отримали ін'єкцію ендопіл. 
Ми обрали введення ендопіл в передній великогомілковий м'язи щурів та дослідили гістологічні зміни.
Вибір великогомілкового м'язу щурів був зроблений через схожість ваги з депресорним м'язом кута рота у людини.

Мета: Дослідити біологічний феномен спричинений ін'єкцією ендопіл в передній великогомілковий м'яз лабораорних щурів Wistar та оцінити зміни в їх ході та гістопатологічні зміни в м'язах, на які був здійснений вплив. 

who are they

Автори

Автори

  1. Головні автори :  
    - Д-р Алан Тененбаум
    - Мауро Тіціані

  2. Томас Юнг Джун Кім 
  3. Ромуло Мене
Докладніше про основних авторів

01

Група
дослідників

Експериментатори: Р.Мене,М.Кім,А.Тененбаум,М.Тіціані

N= 29 (кількість) лабораторний щурів типу Wistar
Вага щура : 421 г.

Походження щурів : Biotério Central of Campus of Ribeirão Preto of São Paulo University
Технічне обслуговування : Experimental Pathology Lab of Pathology Department on Medicine School of Ribeirão Preto – USP
Утримання тварин : поліпропіленові коробки
Їжа тварин : основна лабораторна дієта з водою
Умови освітлення : природні світло/темрява цикли під контролем основних параметрів
Експериментатори : A.Tenenbaum,R.Mené,M.Kim,M.Tiziani

pathology department

02

Підготовка тварин та гістологічних зразків

Conventional Microscopy

Миші були евтаназійовані в CO2 камерах.

  • Розріз шкіри лезом № 23
  • Знаходження та виділення претибіального м'яза ножицями Меценбаума
  • Розтин сухожиль ножицями Мейо.
  • Фіксація ділянок м'язів на зрізах коркового дуба
  • Заливка з використанням 50% розчину формальдегіду - 10% буферного і 50% чистого парафіну для звичайного оптико-мікроскопічного дослідження.
  • Фарбування зрізів як рутинний гістологічний процес.
  • Використаний мікротом: Leika RM 2155
  • Забарвлення м'язових зрізів за допомогою:

-гематоксилін-еозин
-Трихром Массона
-червоний пікро-сіріус..

  • Гістологічне дослідження проводили за допомогою звичайного мікроскопа (Olympus BH2).
  • Спостереження під поляризаційною лампою.
  • Фотографічна документація була реалізована за допомогою мікроскопа Leika DMR, з’єднаного з цифровою камерою Leika CD 300F і сумісним ПК.

     

microtome

03

Матеріал

6 коробок зі щурами
  • Тварини були розділені на 6 коробок, щоб коробки від номеру 1 по 5 мали по 5 щурів, коробка номер 6 містила 4 щура. 
  • Усім тваринам проводили оцінку ходи за відбитком сліду на спеціальному папері та попереднім зануренням задніх лап у мильний розчин.
  • Коробка 1 мала контрольну групу, яка отримала аплікацію 0,1 мл фізіологічного розчину (NaCl 0,9%) на правий претибіальний м'яз.

  • Миші з коробок 2 по 5 отримували 0,1 мл основного продукту Ендопіл Оригінал (Endopeels Original) на той самий м'яз, що й у контрольній групі.

  • Коробка 6 складалася з 4 щурів, кожному з яких підшкірно вводили по 0,5 мл основного продукту Ендопіл.

  • Усіх тварин оцінювали за ходою до і після відповідних ін'єкцій.

boxes for rats

04

Методи

Тварин препарували після 10 днів-1 місяця- 3 mісяців-7 місяців
sacrifice table

Оцінка ходи

Для реєстрації відбитків ніг щурів використовували смужки паперу розміром 43 см завдовжки і 8,7 см завширшки - розміри, які вважаються адекватними для "подіуму" щурів і побудовані відповідно до малюнка De MEDINACELI; FREED; WYATT (1982). Використовували папір, попередньо замочений у розчині бромфенолового синього.

Для приготування паперу бромфеноловий синій в безводній формі (Sigma) розводили в 1% абсолютному ацетоні, набуваючи оранжевого кольору.
Аркуші паперу змочували в цьому розчині і розміщували на сонці для просушування, потім нарізали на смужки і зберігали в поліетиленових пакетах, щоб уникнути вологості, яка могла б змінити синій колір.

gait evaluation

Тварин спонукали ходити по поверхні, вкритій заздалегідь підготовленими паперовими смужками, задніми лапами, змоченими в розчині нейтрального миючого засобу, який відразу змінює колір відбитка з жовтого на синій. Сліди залишаються на паперових смужках, які були залишені для висихання для зчитування необхідних показників для розрахунку функціонального індексу сідничного нерва.
Пізніше вони були проаналізовані за допомогою комп'ютерної програми (програмного забезпечення), розробленої SELLI (1998), для отримання сідничного функціонального індексу, запропонованого BAIN; MACKINNON; HUNTER (1989), який враховує довжину відбитка, загальний розмах пальців стопи між 1-м і 4-м пальцями, а також проміжні пальці - 2-й і 3-й пальці. Відбитки стоп кожної тварини були отримані до нанесення ендопілу, як контроль, і відразу після ін'єкції ендопілу, а також повторно і через певні проміжки часу, коли тварини були препаровані для вилучення переднього великогомілкового м'яза для гістологічного дослідження.

Відбитки стоп оцифровували за допомогою сканера і поміщали в програму SELLI, яка дозволяє фіксувати, ідентифікувати і аналізувати зображення, що дозволяє застосовувати інші методи ідентифікації функціонального індексу сідничного нерва (DE MEDINACELI, FREED & WYATT, 1982; DE MEDINACELI, DERENZO & WYATT, 1984; CARLTON & GOLDBERG, 1986), а також функціональних індексів великогомілкової кістки і малогомілкового нерва (BAIN; MACKINNON & HUNTER, 1989). Після того, як відбиток стопи з'являється на моніторі, його параметри аналізуються і вимірюються, для чого необхідно натиснути на них курсором у правильній, заздалегідь визначеній послідовності. Потім програма обчислює і видає значення індексу, яке також зберігається в комп'ютері.

Сліди миші без жодної ін'єкції

Сліди миші після ін'єкції 0,05 мл у правий переднього великогомілкового м'яз

Розрахунок та вимірювання сідничного функціонального індексу або SFI

SFI Calculation

Схематичне зображення вимірювань, проведених для розрахунку сідничного функціонального індексу.

Е: експериментальна (прооперована нога);

N: нормальна (протилежна нога);

TS: Загальне розкриття пальців стопи (з 1-го по 5-й);

IT: Розкриття проміжних пальців (з 2-го по 4-й);

PL: Довжина стопи

Програма для вимірювання сідничного функціонального індексу SFI

SFI endopeel measurements

Аналіз ходи

gait analysis

Висновки ходи

  • NaCl 0,9%, 0,1 мл в претибіальний м'яз не змінює ходу.

    Ендопіл у дозі 0,1 мл внутрішньом'язово в претибіальний м'яз впливає на ходу акцентовано, одразу після застосування та помірно через 10-30 днів.
    Зміна ходи, спричинена Ендопілом, зменшується з часом при внутрішньом'язовому введенні у цій концентрації.

    Застосування в підшкірну клітковину не настільки ефективне, як внутрішньом'язове.
    При введенні 0,5 мл в підшкірну клітковину (область переднього великогомілкового м'яза) спостерігається прогресуюча втрата ходи, ймовірно, через повільну дифузію Ендопілу з підшкірної клітковини у внутрішньом'язову.